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庆大霉素产生菌原生质体融合高产株与发酵罐试产的研究

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        首先因为原生质体具有细胞壁再生能力,又保持细胞全能性,可按一般细胞诱变方式进行诱变;其次因为原生质体是单个的分散细胞,与诱变剂接触面大。同时诱变后易于形成单菌落,便于分离筛选。采用原生质体融合手段对小单袍菌进行育种、尽管前人已做过许多工作。但所得菌株真正扩大到发酵罐进行稳定生产的尚未见报道。
        本文采用硫酸二乙酯(DES)和紫外线(UV)照射分别对原生质体诱变,诱变后进行融合。硫酸二乙醋(DES)是烷化剂。其对DNA分子的碱基和磷酸部分进行烷化。作用位点往往在鸟嚓岭上。鸟嘌呤被烷化后,易离子化。由酮式变为不稳定的烯醇式,结果发生G:C  A:T转换为G:C  C:C或G:C  T:A而导致突变。紫外线(UV)被UNA分子吸收后引起突变的原因可能是DNA与蛋白质交联;可能是胞嘧啶与尿嘧啶之间的水合作用;也可能是DNA链断裂,有的形成嘧啶二聚体。形成嘧啶二聚体是产生突变的主要原因,嘧啶聚体不仅可以由单链上相邻的两个胸腺嘧啶之间反应后形成,也可以产生于双链相应的两个胸腺嘧啶之间。
        本实验进行原生质体分别诱变、融合、抗性筛选、再生后得到的2株绛红色小单孢菌融合再生株,经摇瓶连续10批次发酵考查。平均发酵单位在2200U/mI又经5L发酵罐连续发酵考查7批次。取得产量平均1900U/m I的好效果;分析其原因可能是用物理化学方法对原生质体进行诱变处理,其对DNA突变的作用位点和机理不同,两种诱变方法处理融合后,令细胞的遗传物质变化较大或互补,同时采用了直接抗性筛选。直接抗性筛选巩固、稳定了突变位点、几种因素叠加在一起使变异产生了协同作用,并获得隐定遗传。筛选到5l发酵罐稳产高产的菌株。

标签:发酵罐

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